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作 者：于夢佳1,劉思霞1,2,周雨1,張馨元1,任曉彤1,周永恒1,楊守莊1,3,李志剛1,4,徐艷春1,5,楊淑慧1

單 位：

東北林業(yè)大學(xué)野生動(dòng)物與自然保護(hù)地學(xué)院，哈爾濱， 150040

濮陽市油田第一中學(xué)，濮陽， 457000

秦皇島野生動(dòng)物園，秦皇島， 066100

唐山動(dòng)物園，唐山， 063020

國家林業(yè)和草原局野生動(dòng)物保護(hù)與利用工程技術(shù)研究中心，哈爾濱，150040

引文信息：

于夢佳,劉思霞,周雨,等.羽翈中DNA和糖皮質(zhì)激素共提取技術(shù)的研究[J].野生動(dòng)物學(xué)報(bào),2024,45(4):800-810.

DOI：10.12375/ysdwxb.20240413

摘  要

羽毛是鳥類研究、監(jiān)測和管理中常用的非損傷性材料，可從中提取DNA和激素進(jìn)行遺傳和生理分析。

然而，作為高度角化的組織，羽翈中的DNA和激素含量極低，提取較為困難。

本研究開發(fā)一種能夠從羽翈中同時(shí)提取總DNA和糖皮質(zhì)激素的方法，命名為DH-CoEx。以丹頂鶴（Grus japonensis）、綠孔雀（Pavo muticus）為代表的大型鳥類廓羽、尾上覆羽和以栗鹀（Emberiza rutila）、小鹀（E.pusilla）為代表的小型鳥類飛羽、絨羽進(jìn)行測試和評(píng)估。

M. DL2000 DNA marker.

采用DH-CoEx提取的羽翈總DNA對(duì)不同長度mtDNA片段的擴(kuò)增效果

DH-CoEx在不同羽翈樣本中的mtDNA提取量

DH-CoEx在不同羽翈樣本中的微衛(wèi)星分型效果

DH-CoEx在不同羽翈樣本中的皮質(zhì)醇激素提取量

結(jié)果顯示：

DH-CoEx能有效從完全角化的羽翈中同時(shí)提取出總DNA及糖皮質(zhì)激素（皮質(zhì)醇）；從5 mg樣本中提取的線粒體DNA（mtDNA）拷貝數(shù)達(dá)到104量級(jí)，可支持長達(dá)1 350 bp的片段擴(kuò)增；所提取的核DNA（nuDNA）質(zhì)量足以進(jìn)行長達(dá)200 bp的微衛(wèi)星等位基因分型，成功率為98.11% ~ 99.60%；提取的皮質(zhì)醇含量達(dá)到了傳統(tǒng)單一提取激素方法的水平，足以進(jìn)行相關(guān)生理學(xué)分析。

以上結(jié)果說明，DH-CoEx是一種簡易、高效和適用性廣泛的方法，實(shí)現(xiàn)了角化材料總DNA和糖皮質(zhì)激素的共提取，可以支持mtDNA和微衛(wèi)星等分子標(biāo)記的分析和應(yīng)激激素的分析，極大地提高了羽毛的利用率，具有廣泛的應(yīng)用潛力。